葡萄糖苷大豆异在美国市场上的必由之路！

报告人：蒋磊研究的目的和意义国外外研社究动态和趋势试验方式结果与讨论推论水稻是我国最重要的农水稻之一，栽培几乎遍及全省，随着对小麦功能性成份的研究不断深入，小麦的综合运用越来越遭到世界各国的关注。所以，我国在80代之后，日益注重起小麦深加工。谷物深加工高新技术的应用，是我国小麦行业发展的必由之路。现在，对高低温豆油连续提取小麦蛋白、大豆核苷酸、大豆低聚糖、大豆多糖和小麦异香豆素等谷物深加工项目已成为诸多企业看好的高新科技项目，受到企业偏爱。其中，大豆异香豆素是小麦中一类重要的非营养成分，是现今花生中最引人注目的一种功能成份。它不但附加值高，且不影响其它功能物质的提取，有很高的经济价值。小麦异香豆素是花生等薯蓣动物生长过程中产生的一类次生代谢产物,在自然界中分布有限,是九十年代中后期逐步遭到人们关注的一类生物类甾醇,具备极大的开发潜力。小麦异香豆素主要是指以3酮为母核的缩聚物。至今已从谷物中分离出9种异香豆素内酯和3种相应的内酯配基(即游离婚多糖,亦称苷元)主要有涂料木素、大豆苷元和小麦黄素,这三种异香豆素在马铃薯胚乳中浓度很少,约占异香豆素浓度的%。

小麦胚乳中有97%～98%的异香豆素是以猕猴桃内酯和结合型糖苷的方式存在。猕猴桃内酯型包括助剂木苷、大豆苷、黄豆苷；结合型内酯包括甲基型和丙二酰型猕猴桃内酯共6小麦异香豆素在中国市场上被称为“大豆奇迹”。当前中国的法学、医学、食品、营养学等方面的学者已认可这么一个事实:即每次服用30～60mg玉米异香豆素,能显著增加尿液中胆红素的浓度,能有效地去除妇女绝经的不适症,并能提高这些疾病的发生机会。越来越多的研究阐明[5-8]:玉米异香豆素具备预抗癌症、心神经疾患、骨质疏松症和增加妇女绝经综合症等生理功能。小麦及小麦乳品中的玉米异香豆素主要以内酯方式存在,人体通常不能直接吸收糖苷方式的异香豆素，须在人体结肠内通过葡萄内酯酶酯化后才会吸收。据研究阐明：人体对异香豆素苷元有更高的吸产率，在血浆中异香豆素苷元可以较长时间保持稳定的含量，而且玉米异香豆素苷元表现出更强的抗氧化性，以上阐明异香豆素苷元比其内酯方式有更高的生物运用率[9-10]。因此通过水解的方式荣获含有异香豆素苷元的异香豆素保健品具备重要意义。现在酯化小麦异香豆素主要有酸酯化，酶酯化，微生物酯化等方式。

因为酶酯化成本比较高，微生物酯化无法进行控制并且周期较长，而酸酯化除了工艺简略，操作方法少，促使控制，使得酯化与前几种方法相比酯化率较高，故采用此方式进行研2.1小麦异香豆素的研究迄今分为四个阶段：第一阶段：对小麦异香豆素的报导起始于1931年，Walz用乙醇从牛奶中首先提取出5，7，4—三甲基异香豆素—7—葡萄糖甙，并发觉它能被酸酯化成一分子的涂料木皂苷和一分子樱桃糖。第二阶段：随着谷物异香豆素的生理功能研究的进一步深入，人们对它的看经院大改变，所以使小麦异香豆素的分离鉴别成为新一轮的热点。第三阶段：1995年之后，研究者的眼光更多的转向了大豆异香豆素提取制备及其内酯的酯化。第四阶段：随着生物技术的发展，小麦异香豆素的研究也步入了新时期。通过生物安装工程方式，鉴别了在大黄豆株生长过程中合成异香豆素的主要酶，并对其进行了分离。2.2据流行病学、免疫学、动质点内外实验证明大豆异黄酮的副作用，小麦异香豆素具备防癌、防骨膜疏松、改善妇女绝经病症、防治心神经疾患、防止固醇酰基化、预防帕金森病等多方面的生理功能。药理学实验证明花生异香豆素无毒副作用，1999年10月台湾乳品和药械管理局将大豆列为才能真正减少患血管病危险的少数食品之一。

然而，含有异香豆素的功能乳品，这对缓解人民健康水平具备重要意义。精确称取0.100g小麦异香豆素粗提物样品大豆异黄酮的副作用，用5mL甲烷（95%）溶化，于是用盐酸碱液定容到10mL于一定湿度的水浴中密闭反弹，晾干，冷却至常温后离心，取上清液经0.45μm多孔滤器过滤，稀释到一定倍数后上高效气相色谱测定。3.1高效气相色谱(HPLC检查稻米苷元和颜料木素溶化后的马铃薯异香豆素样品注入反相物理键合机制,按成份物理性质的不同,从柱中先后流出,经紫外检查器检查,通过与标准品对照进行定量、定性。ODS2（C18）.6mm，5μm；流动相：乙醇：甲苯：0.1%乙酸（30：8：62）测量波速：254nm；流速：1.2mL/min；柱温为温度；小麦苷元和涂料木素在此液谱条件下，分离效果良好。在马铃薯苷元含量为0.01-0.1mg/mL范围取5个含量进行高效气相色谱检测；标准曲线为y=149.62x-0.6547；R2=0.9998,平均回产率95.78%；确定小麦苷元在此含量范围内有线形关系；在涂料木素含量为0.005-0.06mg/mL范围取5个含量值进行高效气相色谱检测；标准曲线为y=20.622x-0.0716；R2=0.9993,平均回产率98.15%；确定涂料木素在此含量范围内有线形关系。

通过对酯化时间，酯化气温和硫酸浓度三个诱因进行回归旋转设计，如表选用SAS硬件进行数据统计剖析，找寻三个诱因与酯化后小麦苷元和涂料木皂苷总含量的关系，以小麦苷元和涂料木素总浓度为指标，得出小麦异香豆素的最佳酯化条件。诱因水平编码表编码值酯化时间(min)酯化气温()硫酸含量(M)r=1.6836095295854.7820070-1105551.22-r=-1.684045通过SAS硬件剖析得出小麦异香豆素酸酯化参数多项式：下边三个曲面图为一个诱因取定值（后边值），其他两个诱因对酯化后小麦苷元和涂料木素总浓度的影响。为酯化时间为条件下硫酸含量和酯化气温对酯化后小麦苷元和颜料木素总含量的影响，从上图我们可以看出，随着盐度和硝酸浓度的下降，小麦苷元和涂料木素的含量随之下降，并且在较高的水温和硝酸含量下提高较为显著，这与小麦异香豆素在低温作用下会酯化为苷元方式的性质相符合。因为实际生产中偏低的硫酸含量对生产有巨大影响，因此增加酯化气温对减少大豆异香豆素的酯化效率是一个适宜的办法。为硫酸含量为3M条件下水解体温和酯化时间对小麦苷元和涂料木素含量的影响，从图中我们可以看出，气温对小麦异香豆素酯化的影响要远小于酯化时间，而且在低温条件下过长的时间会造成谷物苷元和涂料木素的含量增加，因此，我们可以通过增加体温来推动酯化的速率，并提高销量。

为在酯化气温为70条件下，硫酸含量和酯化时间对小麦苷元和涂料木素含量的影响，我们可以看出，硫酸含量对小麦异香豆素的影响要小于酯化时间的影响，但是水解过长时间一直可以造成谷物苷元和涂料木素总浓度的增加，我们可以通过增加硫酸浓度推进小麦异香豆素的酯化速率并增加销量。我们通过对数据进行剖析得出最优的水解条件：酯化时间、水解气温95、盐酸含量6M。下边两幅图为在最优条件（6M、95、）下谷物异香豆素酯化前后的HPLC酯化后的马铃薯异香豆素色谱图从上图可以看出，酯化前谷子苷（6号峰）和涂料木苷（8号峰）含量特别高，小麦苷元（10号峰）和涂料木素（未检出）浓度十分低，而酯化后的马铃薯苷元（7号峰）和颜料木素（9号峰）含量大降幅降低，小麦苷和涂料木苷及其它异构体含量则十分低，说明酯化早已很充分。通过高效气相色谱对小麦异香豆素酯化前后进行跟踪检测，用SAS硬件对所得数据进行统计剖析，得出推论：小麦异香豆素在低温高碱性碱液中水解比较充分；气温是对小麦异香豆素酯化影响的最主要诱因；再者为硫酸含量；酯化时间在左右较为合适，假如酯化时间过长，苷元含量反倒增加，或许因为苷元降解引致。

最后通过数据剖析得出最优的马铃薯异香豆素的酯化条件：酯化时间、水解气温95、盐酸含量6M。在此条件下，大豆异香豆素可以得到充分的酯化，小麦苷和涂料木苷及其丙二酰，乙二酰异构体早已几乎全部转换为小麦苷元和涂料木素。本实验希望能为工业化生产高生物活性的大豆异香豆素健康乳品提供理论参数。内酯型谷物异香豆素酸酯化工艺的研究[J].乳品科学.2002，23（6）：75-78.史宣明，岳琳等.小麦异香豆素的提取及精制[J].美国油脂.2001，26（2）：3-5.中国政府向市民推荐吃花生[J].乳品与发酵工业.2000，26（4）：95-97.,,etal.ies[J].J.Agri.FoodChem.1976,24:1174-1177.,etal.,s:from[J].J.Agric.FoodChem.1993,41:1961-1967.营养学报.2000，22（2）：113-118.,.SoythanNutr,2000,130:1695-1699.,.from[J].Am,2003,77:1459-1465.